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PCR實(shi)驗(yan)室又(you)叫(jiao)基因擴增實(shi)驗(yan)室。PCR是(shi)聚合酶鏈(lian)式反(fan)應的(de)(de)簡稱。是(shi)一種分(fen)子生物學技術，用于(yu)放(fang)大特定的(de)(de)DNA片段，可看作生物體(ti)(ti)外(wai)的(de)(de)特殊(shu)DNA復制。通過DNA基因追蹤系(xi)統，能(neng)迅速掌握患(huan)者體(ti)(ti)內的(de)(de)病毒含(han)量，其確度高達(da)納米級(ji)別。在實(shi)際實(shi)驗(yan)過程中有哪些問題需要注意的(de)(de)。

一、PCR實驗(yan)室(shi)的污染來(lai)源有(you)哪些？

1.樣本間交叉感染(ran)：

收集樣(yang)(yang)本(ben)(ben)的容器被污(wu)染或樣(yang)(yang)本(ben)(ben)密封不嚴(yan)導致(zhi)外溢；不同樣(yang)(yang)本(ben)(ben)移液(ye)時(shi)(shi)忘記(ji)更換槍(qiang)尖(jian)或未使用帶濾芯(xin)槍(qiang)尖(jian)；移液(ye)器等實驗(yan)器具(ju)及耗(hao)材(cai)未及時(shi)(shi)消毒滅(mie)菌；不同樣(yang)(yang)本(ben)(ben)同時(shi)(shi)開蓋或樣(yang)(yang)本(ben)(ben)劇烈(lie)震蕩、反復(fu)吹(chui)吸導致(zhi)氣溶膠形成(cheng)擴散，相(xiang)互交叉污(wu)染。

2.實驗試(shi)劑(ji)污(wu)染(ran)：

主要是在 PCR 組分(fen)試(shi)(shi)劑加(jia)(jia)樣(yang)過(guo)程中，由于移(yi)液器(qi)、容器(qi)、陰(yin)性(xing)對(dui)照及(ji)其它試(shi)(shi)劑被核酸模板(ban)或陽性(xing)對(dui)照污染。加(jia)(jia)樣(yang)過(guo)程中，因為PCR試(shi)(shi)劑對(dui)溫度(du)十(shi)分(fen)敏感，需(xu)要通過(guo)冰浴使得(de)PCR試(shi)(shi)劑和PCR板(ban)/管處于0℃，但這個過(guo)程也充滿污染風險。

3.擴增產物污染：

大(da)量(liang)拷貝(bei)的(de)產(chan)物泄漏或擴增后的(de)PCR反應管意(yi)外(wai)開蓋，這是PCR反應中(zhong)最(zui)(zui)主要、最(zui)(zui)常見的(de)污染問題。因為PCR產物拷貝(bei)量大，遠(yuan)(yuan)遠(yuan)(yuan)高于(yu)PCR檢測數個(ge)拷貝(bei)的(de)極限，所以極微量的(de)PCR產物污染，就可(ke)形成假陽性。

4.克隆質粒(li)污染：

作為(wei)陽(yang)性質(zhi)控品的克隆質(zhi)粒外溢。 

二(er)、PCR實(shi)驗室污(wu)染應急處理方法

1、若核酸樣本溢出：

立即用布或紙巾覆蓋，由外圍向中心(xin)傾倒10%的次氯酸消(xiao)毒(du)劑，約30分鐘后，清除污染物(wu)品，再用次氯酸消(xiao)毒(du)劑擦拭(shi)，并用75%酒精(jing)噴灑，移動紫外(wai)車定(ding)點(dian)照射1小時。

2.其他不明(ming)情況污染：

1、暫停所有實(shi)驗(yan)操作；

2、清理實驗室內所有物品，尋找污染(ran)來源；

3、加大(da)實驗室(shi)的通風；

4、對(dui)實驗(yan)室(shi)內(nei)所(suo)有表面（臺面、地(di)面及(ji)墻(qiang)面） 進行消毒；

5、75%酒精空中(zhong)噴霧；

6、開啟紫外消毒裝置(zhi)，延長紫外照射時間（4小時以(yi)上(shang)）；

7、以上措(cuo)施每日(ri)進(jin)(jin)行，直至污(wu)染消除；用(yong)新試劑及確認無污(wu)染的器(qi)材進(jin)(jin)行原(yuan)污(wu)染項目的試劑空白檢測，連(lian)續3次均陰性后方可進(jin)(jin)行常(chang)規檢測。

負(fu)壓(ya)實(shi)(shi)驗室，是檢測病毒樣本的(de)(de)最基本條件。所謂負(fu)壓(ya)，就是在(zai)實(shi)(shi)驗室內(nei)氣(qi)(qi)壓(ya)比(bi)實(shi)(shi)驗室外環境的(de)(de)正常氣(qi)(qi)壓(ya)要(yao)低，在(zai)實(shi)(shi)驗室內(nei)外產生一定的(de)(de)壓(ya)力差(cha)，從而(er)控制氣(qi)(qi)體流(liu)(liu)動的(de)(de)方向，保(bao)證氣(qi)(qi)流(liu)(liu)從實(shi)(shi)驗室外流(liu)(liu)向實(shi)(shi)驗室內(nei)，負(fu)壓(ya)能確保(bao)室內(nei)空氣(qi)(qi)不會泄漏出去造成污染(ran)，可以(yi)有效的(de)(de)保(bao)護環境。